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分析細胞因子選購的四要素點擊次數(shù):1354 更新時間:2017-04-18

   免疫系統(tǒng)是相當嘈雜的,B細胞與巨嗜細胞溝通,巨嗜細胞與T細胞交流,而T細胞則與免疫系統(tǒng)的所有成員通訊。細胞間交談的語言是細胞因子,包括趨化因子和生長因子在內(nèi)的各種細胞因子共同介導著機體內(nèi)的細胞間通訊。
  細胞分泌出的細胞因子,是能夠誘導細胞增殖、生長或分化等多種生理學反應的蛋白小分子,其中包括白介素、干擾素等免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)子,成纖維細胞生長因子FGF、血管內(nèi)皮生長因子VEGF等生長因子,以及CCL2、CXCL8那樣的趨化因子(趨化因子誘導細胞遷移或趨化性)。對這些小分子蛋白進行研究有多種工具,人們可以通過抗體檢測、ELISA、定量RT-PCR以及生物活性實驗來檢測蛋白的豐度和活性。
  在這些研究中往往需要用到純化的細胞因子,來刺激體外培養(yǎng)的細胞或者作為ELISA實驗中的陽性對照?,F(xiàn)在市面上有大量的細胞因子可供選擇,我們可以方便地在各大供應商的上進行搜索。那么如何才能從中選到的蛋白產(chǎn)品呢,以下四個方面不可忽視。
  有些蛋白需要經(jīng)過翻譯后修飾才具有活性,哺乳動物細胞可以提供這樣的修飾,但細菌細胞往往不能。因此,在選購這類蛋白時應該特別留意產(chǎn)品說明書中的蛋白來源。例如,R&D公司的人TGF-beta 1蛋白是在中國倉鼠卵巢細胞中制備的,其人CCL2蛋白則是在大腸桿菌E. coli中制備的。
  蛋白的形式
  重組生長因子通常有兩種形式:含牛血清白蛋白BSA或不含BSA,選擇哪一種*取決于實驗的需要。據(jù)eBioscience公司的資料介紹,BSA是一種穩(wěn)定劑,含BSA的蛋白可以作為ELISA實驗中的理想標準品。而當BSA可能影響實驗結果時可以采用不含BSA的蛋白,carrier-free形式的蛋白尤其適用于活體實驗。
  生物活性和應用
  不論買什么,選擇質量放心的產(chǎn)品總沒錯。聲譽好的公司會對其蛋白產(chǎn)品進行各種質控,以確保蛋白的品質和實驗效果。他們往往會在說明書中提供蛋白純度、內(nèi)毒素含量、SDS-PAGE結果圖等多種數(shù)據(jù)。
  在選擇蛋白產(chǎn)品時生物活性也是需要考慮到的因素。舉例來說,R&D公司用趨化因子CCL2處理轉染了人CCR2A的BaF3小鼠pro-B細胞和培養(yǎng)了兩日的人類單核細胞,以此衡量CCL2的趨化能力。而eBiosciences用TGF-beta 1來抑制IL-4誘導的HT-2細胞增殖,從而檢測TGF-beta 1的生物活性。
  生物活性往往以units/ml或ED50(能引起50%zui大反應強度的量)為單位,需要注意的是不同實驗的ED50并不相同,供應商們不可能把蛋白的每種應用都一一測試全。我們需要在供應商列出的應用清單中尋找我們所需要的實驗信息。
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