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Caspase活性檢測相關問題解答點擊次數(shù)：3973 更新時間：2012-02-01
Caspase活性檢測相關問題解答
1：Caspase活性測試是如何使用的？m.nhome100.com
答：Caspase活性測試為在細胞裂解液中檢測蛋白酶活性提供了簡捷方便的手段。當對專一Caspase的多肽底物被裂解時，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測定。將從細胞凋亡樣本得到的信號同未經(jīng)誘導的對照樣本進行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數(shù)，而Caspase酶活性是同檢測到的信號直接成正比。
2：Caspase活性測試是否可用于定量檢測？
答：R&D Systems的Caspase活性測定試劑盒可作為半定量測試。檢測結(jié)果用于測量在細胞凋亡細胞中與未經(jīng)誘導細胞中的Caspase活性倍數(shù)的增加。實驗時，采用本底對照(無細胞裂解液或無底物的反應)。如果本底對照也有一定的讀數(shù)，這一讀數(shù)應當在記算倍數(shù)增加之前從試驗數(shù)據(jù)中差減。
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3：Caspase活性檢測同Caspase ELISA試劑盒有何不同？
答：Caspase活性檢測用于測定不同Caspase的蛋白酶的活性，表達為比未誘導樣本的倍數(shù)增加。Caspase ELISA試劑盒用于測定不同Caspase在樣本中的含量，以pg /mL定量表達。
4：caspase X 活性測試是對caspase X專一的嗎？
答：大多數(shù)caspase會裂解所有的底物，它們根據(jù)Michaelis-Menton動力學趨于選擇某一底物而非另一底物，但沒有任何底物是對某一Caspase專一的。比如，Caspase 3和Caspase 7都可裂解DEVD底物；Caspase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&D Systems為每一Caspase選擇了它所適宜的底物。如果反應進行的太久，一些Caspase會激活另一些Caspase。
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5：Caspase活性檢測試劑盒中的細胞裂解液是否同其它試劑盒中的一樣？
答：所有的Caspase活性檢測試劑盒中的細胞裂解液都是一樣的。所以，可用它裂解細胞，和用于多種Caspase活性的測試。
6：R&D Systems的Caspase抑制劑是否可逆？
答：所有R&D Systems的Caspase抑制劑在N端有苯甲氧碳基(Z-)和FMK功能組，它們可穿孔細胞，是不可逆轉(zhuǎn)的。
7：R&D Systems是否為Caspase活性檢測提供陽性對照？
答：R&D Systems提供多種重組Caspase酶，它們是理想的陽性對照。如果試驗者自己想建立一陽性對照，有許多可以產(chǎn)生細胞凋亡的陽性對照的方法都已發(fā)表。如果將細胞同2 mM星形孢菌素(Staurosporin)溫育2小時，可誘導絕大多數(shù)細胞類型進入細胞凋亡。R&D Systems有文獻資料列舉了對Caspase如何產(chǎn)生陽性對照，可向我們的技術服務索取。
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